Возможны противопоказания. Необходимо ознакомиться с инструкцией или проконсультироваться со специалистомРусский   ENGLISH

Мирамистин® и инфекции передаваемые половым путем

КРИВОШЕИН Ю. С., РУДЬКО А. П.

Действие 0,01% раствора Мирамистина® на возбудителей инфекций, передаваемых половым путем.

Опыты in vitro

Изучение антимикробного спектра действия Мирамистина® по казало его одновременное бактерицидное действие на грамположительные, грамотрицательные бактерии, грибы и вирусы. Исходя из этих данных мы решили исследовать в опытах in vitro действие 0,01%го водного раствора Мирамистина® (РМ) на возбудителей ИППП (трепонемы, гонококки, трихомонады). В качестве препарата сравнения использовали бензалкония хлорид. Это поверхностноактивное вещество (ПАВ) является основой препарата Фарматекс, используемого в качестве контрацептива и средства профилактики ВИЧ/ИППП.

Для изучения трепонемоцидного действия РМ использовали взвесь бледных трепонем (30-70 подвижных трепонем в поле зрения), полученную экстрагированием из материала твердого шанкра мошонки кролика, зараженного Treponema pallidum (штамм Никольса). На предметное стекло пастеровской пипеткой наносили каплю взвеси трепонем, добавляли к ней каплю исследуемого препарата, накрывали покровным стеклом (препарат «раздавленной капли»). Учет подвижности и наличие лизиса отмечали при микроскопии в темном поле на протяжении 15 мин следующим образом: активная (++++), хорошая (+++), умеренная (++), сниженная (+), отсутствие подвижности (-), лизис трепонем (Л). Контролем служил аналогично приготовленный нативный препарат, состоящий из равных объемов взвеси трепонем и изотонического раствора хлорида натрия (ИХН). За минимальную трепонемоцидную концентрацию препарата принимали его наибольшее разведение, которое угнетало подвижность или вызывало лизис трепонем в течение 10 мин.

Трихомонацидное действие РМ изучали на 7 культурах Trichomonas vaginalis -вагинальных трихомонад, выделенных (на среде Джонсона-Трассела) от больных трихомониазом. Методика изучения трихомонацидных свойств препаратов аналогична методике исследования трепонемоцидного действия. Минимальной трихомонацидной концентрацией препарата считалась та, которая вызывала прекращение подвижности трихомонад в нативном препарате раздавленной капли в течение 10 мин. Кроме того, отмытый центрифугированием осадок трихомонад после инкубации с препаратом засевали на питательную среду Джонсона-Трассела и инкубировали при 36,5 оС в течение 7 сут. Отсутствие или наличие роста трихомонад определяли микроскопированием нативных препаратов, приготовленных из опытных и контрольных посевов на питательных средах.

Гонококкцидное действие РМ изучали на 30 штаммах Neisseria gonorrhoeae, выделенных от больных гонореей путем посева гнойного отделяемого уретры на сывороточный агар. Выделенную чистую культуру гонококков накапливали в про бирках на скошенном сывороточном агаре, смывали и готовили 1миллиардную взвесь на ИХН. Взвесь разливали по 0,5 мл в стерильные пробирки и в каждую добавляли по 0,5 мл препарата. В результате разведения концентрация бактерий в 1 мл составляла 500 млн. микробных тел, а препарата - в 2 раза меньше исходной. Контролем служила смесь следующего состава: 0,5 мл 1миллиардной взвеси гонококков + 0,5 мл ИХН. Опытные и контрольные пробирки инкубировали при комнатной температуре, периодически встряхивая, через 5, 10 и 15 мин по 2 пробирки центрифугировали при 2000 об/мин, надосадочную жидкость удаляли, осадок дважды отмывали с ресуспендированием в ИХН. После этого бактерии засевали на сывороточный агар в пробирках, которые инкубировали при 37°С в атмосфере CO2. Учет результатов проводили через 24, 48, 72 и 96 ч. О гонококкцидном действии препаратов судили по отсутствию роста на питательных средах.

Результаты опытов по определению микробицидного действия Мирамистина® на возбудителей ИППП представлены в табл. 1.

Таблица 1.
Результаты определения трепонемо, трихомонадо и гонококкоцидного действия водных растворов Мирамистина® и бензалкония хлорида

Тесткультура (кво штам мов)

Препарат

Срок до появления признаков микро бицидного действия препарата (мин) в зависимости от его концентрации (%)

 

 

0,01

0,008

0,007

0,006

0,005

0,004

T. pallidum

Мирамистин®

1-3

3-7

10

-

-

-

(2)

Бензалкония хлорид

3-5

7-10

15

-

-

-

T. vaginalis

Мирамистин®

1-3

5-10

15

-

-

-

(7)

Бензалкония хлорид

5-7

10-15

-

-

-

-

N. gonorrhoeae

Мирамистин®

3

3

5

15

-

-

(30)

Бензалкония хлорид

5

5

15

-

-

-

Примечание: «-» - отсутствие «бактерицидного» действия

Из полученных данных следует, что в условиях прямого кон такта in vitro РМ в концентрациях 0,01-0,007% в течение 1-10 мин оказывает микробицидное действие в отношении возбудителей сифилиса, трихомониаза и гонореи. По сравнению с бензалкония хлоридом РМ оказывал более выраженное трепонемо, трихомонадо и гонококкоцидное действие (на 2-5 мин быстрее).

Опыты in vivo

1. Профилактика экспериментального сифилиса.

С целью изучения профилактического действия Мирамистина® при венерических заболеваниях использовали модель экспериментального сифилиса на кроликах. Опыты поставлены на 34 кроликах породы шиншилла весом 2,0-3,0 кг. На 24 из них изучали профилактическое действие РМ (группа 1). Контролем служили 6 кроликов, которых обрабатывали после заражения дистиллированной водой (группа 2) и 4 кролика - без обработки препаратом (группа 3).

Для заражения животных готовили свежую взвесь Treponema pallidum (штамм Никольса) из ткани твердого шанкра мошонки кролика и разводили ее ИХН до концентрации 15-20 трепонем в поле зрения (соответствующей содержанию возбудителя сифилиса в серуме из свежего шанкра у человека). Профилактическое действие препаратов изучали при заражении животных накожным способом. Для этого на освобожденный от волосяного покрова и слегка скарифицированный участок кожи мошонки кролика наносили приготовленную взвесь трепонем, слегка втирали ее стеклянной глазной лопаткой. Через 15 мин, 1, 2, 3 и 5 ч производили обработку этого участка кожи 0,01%м раствором Мирамистина® (группа 1). Контрольных животных аналогичным образом обрабатывали дистиллированной водой - через 15 мин. после заражения (группа 2) или оставляли без обработки (группа 3).

Все кролики находились на клиникосерологическом контроле в течение 9-12 мес. Периодически 1-2 раза в месяц проводили тщательный клинический осмотр и 1 раз в 1,5 месяца с кровью животных ставили серологические реакции: Вассермана (РВ), иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) и иммунофлюоресценции (РИФ). По окончании указанного срока наблюдения от всех животных перевивали подколенные лимфатические узлы интактным кроликам, а подопытных реинфицировали бледной трепонемой идентичного штамма (Рис. 1). Положительный результат реинфицирования животного расценивали как отсутствие у него скрытой сифилитической инфекции и иммунитета к возбудителю.

Результаты клиникосерологического контроля за животными представлены в табл. 2 и на рисунке.

Таблица 2.
Результаты клиникосерологического контроля кроликов, первично инфицированных Treponema pallidum и обработанных с профилактической целью 0,01% раствором Мирамистина®

Группа и кол-во животных

Сроки обработки (после заражения, ч)

Количество животных с клиническими и микробиологическими (А)* или серологическими (Б) признаками сифилиса в разные сроки после инфицирования (мес)

 

 

 

Б

 

 

А

1,5

3

4

5,5

7

8

9

10

11

12

 

0,25

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

 

1

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

1 (опыт),

2

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

n=4

3

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

 

4

1

4

4

4

НИ

НИ

НИ

НИ

НИ

НИ

НИ

 

5

1

4

4

4

НИ

НИ

НИ

НИ

НИ

НИ

НИ

2 (контроль), n=6

0,25

6

6

6

6

НИ

НИ

НИ

НИ

НИ

НИ

НИ

3 (контроль), n=4

Без обра ботки

4

4

4

4

НИ

НИ

НИ

НИ

НИ

НИ

НИ

Примечания: * наличие шанкра или обнаружение трепонем в серуме; НИ - не исследовали

Как следует из данных, приведенных в табл. 1, в опытной группе (№ 1, 24 животных) после обработки РМ через различные сроки после инфицирования кожи Treponema pallidum защитный эффект проявлялся при сроках обработки до 3 ч включительно. У одного из кроликов, обработанных РМ через 4 ч, а также у контрольных животных (группы 2 и 3), развился сифилис с формированием типичного твердого шанкра и наличием в его серуме трепонем, а также с резко положительной сероконверсией.

При наблюдении за кроликами, которым были перевиты лимфоузлы от выживших подопытных животных (всего 21), в течение 12 мес не обнаруживались трепонемы в серуме и какие-либо признаки сероконверсии - при исследовании сыворотки крови. Все выжившие подопытные животные были реинфицированы тем же штаммом Treponema pallidum. Спустя 1 мес у них на месте введения образовался типичный шанкр, а при исследовании сывороток крови через 1,5-3 мес после инфицирования отмечали положительные результаты в РВ, РИБТ и РИФ, что свидетельствовало об истинности защитного эффекта, полученного после обработки животных РМ.

Таким образом, на модели экспериментального сифилиса у кроликов получены результаты, позволяющие сделать вывод, что обработка кожи животных РМ в течение 3 ч после заражения Treponema pallidum (штамм Никольса) предупреждает развитие заболевания у экспериментальных животных.

2. Гонококкоцидное действие Мирамистина®. Изучение гонококкоцидного действия РМ (группа 1) in vivo проводили по общепринятой методике экспериментальной гонококковой септицемии белых мышей. В качестве контроля использовали группы животных, которым вводили внутрибрюшинно взвесь гонококков, обработанных следующим образом: контроль 1 - 0,05% раствором бензалкония хлорида; контроль 2 -дистиллированной водой.

С этой целью готовили взвесь чистой культуры гонококков в ИХН (1 млрд. микробных тел в 1 мл), которую смешивали с равным объемом выше указанных препаратов. После 5минутного инкубирования смеси дважды отмывали от препарата с помощью центрифугирования, после чего осадок ресуспензировали в 0,3 мл ИХН, прибавляли исследуемый препарат и вводили внутрибрюшинно мышам. Общий объем вводимой жидкости в опыте и контроле составлял 0,8 мл. Эффект оценивали по гибели животных от гонококковой септицемии. Всего в опытах использовано 30 мышей. Результаты исследований представлены в табл. 3.

Таблица 3.
Результаты изучения гонококкоцидного действия РМ и бензалкония хлорида, полученные при внутрибрюшинном заражении белых мышей

Группа зараженных животных

Количество погибших животных в группе

Эффективность гонококкоцидного действия (в %)

Опыт (обработка 0,01% мирамистином)

0/10

100

Контроль 1 (обработка 0,05% бензалкония хлоридом)

3/10

70

Контроль 2 (контакт с дистиллированной водой)

10/10

0

Полученные результаты свидетельствуют о том, что в условиях эксперимента РМ в 100% случаев предупреждают развитие гонококковой септицемии (после внутрибрюшинного введения смертельной дозы гонококков ни одно из животных не погибло). В то же время эффективность защиты экспериментальных животных при использовании 0,05% раствора бензалкония хлорида составила лишь 70%. В контрольной группе, где вместо антисептических препаратов использовали дистиллированную воду гибель всех животных отмечалась в течение первых 20-24 часов после введения той же дозы гонококков.

Микроскопические исследования препаратов из тканей раз личных органов павших животных позволили выявить типичную картину гонококковой септицемии у мышей. Гонококки обнаружены внутри клеток и располагались также внеклеточно.

Следовательно, РМ обладает выраженным гонококкоцидным действием, превосходящими по антигонококковой активности бензалконий хлорид.

3. Профилактическое действие РМ при вагинальном заражении мышей герпесвирусом 2 типа (HSV2)*.

Опыты ставили на 50 белых мышахсамках (табл. 4). Мышей заражали интравагинально вирусом герпеса 2 типа (HSV2). Для этого с помощью стеклянной палочки раздражали слизистую оболочку влагалища, затем интравагинально вводили с помощью туберкулинового шприца 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей 2,5 х 107 ед/мл HSV2.

Животным опытной группы спустя 15 мин после заражения с помощью туберкулинового шприца интравагинально вводили 0,1 мл РМ, а мышам контрольной группы 1 - 0,1 мл дистиллированной воды. Животных контрольной группы 2 после заражения HSV2 оставляли без обработки.

Наблюдение за животными показало, что у 19 из 20 мышей контрольной группы 1 и у всех мышей контрольной группы 2 развивались явления энцефалита. К 6-10му дню все животные погибали. В тоже время из 20 мышей опытной группы, которых после заражения обрабатывали РМ, не погибло ни одно животное.

Следовательно, можно констатировать, что обработка Мирамистином® влагалища у мышей после их инфицирования HSV2, в 100% случаев предохраняет животных от заражения герпесвирусной инфекцией.

Таблица 4
Профилактическая эффективность РМ при экспериментальной герпетической инфекции у мышей, вызванной HSV2

Группа зараженных животных

Количество погибших животных в группе

Эффективность противогерпетического действия (в %)

Опыт (обработка РМ)

0/20

100

Контроль 1 (обработка дист. водой)

19/20

5

Контроль 2 (без обра ботки)

10/10

0

* Эта часть работы выполнена на базе Шведского института по контролю за инфекционны ми заболеваниями (Стокгольм) в рамках Международного гранта (проект INTAS UA 9555)

4. Профилактическое действие РМ на модели вагинального кандидоза у морских свинок.

Модель вагинального кандидоза у морских свинок воспроизводили путём скарификации слизистой оболочки влагалища с последующим интравагинальным введением 0,1 мл взвеси, содержащей 10 млн. микробных клеток C. albicans. Полученные результаты представлены в табл. 5.

Таблица 5
Результаты определения профилактической эффективности РМ при экспериментальном вагинальном кандидозе у морских свинок

Группа и количество животных

День наблюдения

Количество животных с клиническими и микологическими признаками кандидоза

Гиперемия

Отёк

Пустулёзные высыпания

Эрозии

Язвы

Выделения

Высев C. albi cans

 

2

3

2

0

0

0

0

2

Опытная (n=10)

4

0

0

0

0

0

0

0

6

0

0

0

0

0

0

0

10

0

0

0

0

0

0

0

 

30

0

0

0

0

0

0

0

 

2

8

8

3

3

1

8

8

Конт

4

7

7

3

3

1

7

6

роль № 1 (n=10)

6

4

3

2

2

0

4

3

10

2

0

0

0

0

2

0

 

30

0

0

0

0

0

0

0

 

2

6

6

5

5

4

6

6

Конт

4

6

6

6

6

5

6

6

роль № 2 (n=6)

6

6

6

6

6

6

6

6

10

6

6

5

6

5

6

5

30

0

0

0

0

0

0

0

Из полученных данных следует, что в контрольной группе 2 (6 животных, без обработки) на вторые сутки после инфицирования у всех животных отмечаются признаки кандидоза: гиперемия слизистой оболочки влагалища, отечность, пустулезные высыпания, выделения белого цвета; при посеве отделяемого влагалища на среду Сабуро выделяется культура С.albicans. В последующие дни на слизистой влагалища обнаруживались множественные эрозии и язвы, увеличивалось количество вы делений. Животные вели себя беспокойно, отказывались поедать корм. Процесс прогрессировал в течение 10-12 сут, после чего отмечалось постепенное стихание гнойновоспалительных проявлений, а через 30 дней отмечалось клиническое и микробиологическое выздоровление.

У животных контрольной группы 1 (10 животных с обработкой дистиллированной водой) отмечали такие же воспалительные проявления, как у животных 1й контрольной группы. Прогрессирование процесса происходило в течение 2 недель, затем гнойновоспалительные проявления постепенно стихали и через 1 месяц отмечалось клиническое и микробиологическое выздоровление.

Из 10 морских свинок опытной группы (с обработкой влагалища РМ через 15 мин после заражения) лишь у 2 животных на 2е сутки наблюдали незначительную гиперемию и отечность слизистой оболочки влагалища и скудные выделения. Посевы отделяемого влагалища животных на 2й день на среду Сабуро в 3 случаях дали положительный результат. Осмотр и микробиологические исследования в опытной группе, проведенные на 4й, 6й и 10й дни, показали отсутствие видимых изменений со стороны слизистой оболочки влагалища и отсутствие С. albicans в посевном материале. Животные вели себя спокойно и охотно поедали корм.

Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что обработка влагалища самок морских свинок РМ после заражения их С. albicans, надежно защищает животных от развития экспериментальной кандидозной инфекции.

* * *

На основании материалов экспериментальных исследований, представленных в Фармакологический комитет МЗ СССР, было получено разрешение на проведение клинических испытаний 0,01% раствора Мирамистина® как наружного средства индивидуальной профилактики венерических болезней у людей. Клинические испытания, проведенные в 5 ведущих научных дерматовенерологических центрах СССР, показали высокую профилактическую эффективность препарата у людей. Приказом МЗ СССР № 139 от 31 мая 1991 г 0,01% раствор Мирамистина® разрешен для медицинского использования в качестве индивидуального средства профилактики венерических заболеваний.

Из материалов городского научно-практического семинара «Использование препарата Мирамистин® в лечебно-профилактических учреждениях г. Москвы» (НИИ СП им. Н. В. Склифосовского, 09.04.2003 г)