Возможны противопоказания. Необходимо ознакомиться с инструкцией или проконсультироваться со специалистом РУССКИЙ    ENGLISH

Эффективность на культурах грибов

ИЗ МАТЕРИАЛОВ ТРЕТЬЕГО ВСЕРОССИЙСКОГО КОНГРЕССА ПО МЕДИЦИНСКОЙ МИКОЛОГИИ
(Москва, 24 25 марта 2005 г.)

АРЗУМАНЯН В. Г.1, КИРИЧЕНКО И. М. 2

1. НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова РАМН. 2. ММА им. И. М. Сеченова

Оценка эффективности Мирамистина® in vitro на культурах клинически значимых дрожжевых грибов

За последние десятилетия вследствие активной антибиотикотерапии постоянно растет удельный вес заболеваний, ассоциированных с грибковой микрофлорой. Среди прочих грибов значительная часть клинических изолятов представлена дрожжами - аско и базидиомицетами, которые в вегетативной стадии размножаются почкованием или делением, что приводит к одноклеточному росту [Kurtsman C. P., Fell J. W., 1998]. На се годняшний день наиболее клинически значимыми считают та кие грибы, как Candida, Rhodotorula, Cryptococcus, Trichosporon, Geotrichum и Malassezia, а также их телеоморфы. Важнейшим направлением клинической микологии является разработка, оценка и внедрение эффективных противогрибковых препаратов. В ГУ НИИВС им. И. И. Мечникова РАМН с 1999 года проводятся исследования по сравнительному анализу действия различных антимикотиков на культуры клинических изолятов дрожжевых грибов. В этот список препаратов вошел и Мирамистин®. Целью настоящей работы явилась оценка действия Мирамистина® на культуры различных родов клинически значимых дрожжей в сравнении с прочими антимикотиками.

В работе использованы культуры аско и базидиомицетных дрожжей, ранее выделенные нами от пациентов с атопическим дерматитом и аллергическими бронхолегочными заболевания ми, хранящиеся в коллекции НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова РАМН [Арзуманян В. Г., Семенов Б. Ф., 2001]. Изоляты нелипофильных дрожжей идентифицированы классическим физиологобиохимическим методом [Yarrow D., 1998] с использованием компьютерной программы Барнетта [Barnett J., 1996]. Дрожжи рода Malassezia получены и идентифицированы согласно методике Гийо и Гэо [Guillot J., Gueho E., 1996]. Для исследования отобраны 7 изолятов Candida albicans, 7 изолятов дрожжей Malassezia, 6 из которых являются

M. sympodialis, 1 - M. furfur. Дрожжи рода Rhodotorula представ лены видами R. glutinis (8 культур), R. aurantiaca (7), R. mucilagi nosa (3) и R. minuta (1). Все 5 изолятов Cryptococcus spp. идентифицированы как C. albicans, а дрожжи рода Trichosporon включали 5 изолятов: T. inkin - 1, T. cutaneum - 1, T. ovoides - 1,  T. asahii - 2.

В качестве исследуемого материала использовали 2суточ ные культуры, выращенные на плотной среде ГПД при 25°С (нелипофильные дрожжи) или среде Диксона при 32 °С (Malassezia spp.). Исходная концентрация жизнеспособных клеток составляла 1х103-1х104 КОЕ/мл. Диапазон исследованных концентраций Мирамистина® составлял от 2 до 256 мкг/мл, в случае Malassezia - до 512 мкг/мл. Изучение минимальных подавляющих рост концентраций (МПК) проводили в стерильных круглодонных пластиковых планшетах на 96 лунок при 25°С. Вначале в один ряд по вертикали вносили аликвоты препаратов, затем в остальные ячейки - стерильную дистиллированную воду и делали двукратные разведения препаратов с помощью многоканального дозатора. После этого ячейки заполняли заранее приготовленной суспензией клеток в жидкой синтетической среде, оптимальной для роста всех известных нелипофильных дрожжей [Yarrow D., 1998]. О росте культур судили по изменению цвета введенного в эту среду рНиндикатора (неизменный цвет означал торможение роста).

Проверку чувствительности культур Malassezia spp. проводили модифицированным методом разведений в агаре [Hammer K. A. et al., 2000]. Модификация заключалась в использовании 96лу ночных плоскодонных планшетов, в которые вносили аликвоты концентрированных препаратов и делали их серийные двукратные разведения. Затем в ячейки вносили инокулированный теплый агар Диксона, и инкубировали 5-6 суток при 32°С до появления микроколоний в контрольном агаре (не содержащем антимикотиков). За МПК препарата принимали его минимальную концентрацию, при которой образования микроколоний не отмечалось.

Наиболее чувствительными к Мирамистину® оказались дрожжи C. albicans, МПК для которых составили менее 16 мкг/мл. Проверка 7 изолятов C. albicans с мирамистином показала, что начало ингибирования роста (небольшое изменение цвета индикатора) на 4 сутки соответствовало концентрации 16-64 мкг/мл, а минимальная концентрация, при которой рост совсем отсутствовал, была равна 128 мкг/мл. Все изоляты Trichosporon spp. не росли уже при 64 мкг/мл, а рост большинства культур Rhodotorula spp. был подавлен 32 мкг/мл. Из этого списка родов резко выделялись Malassezia, для которых характерны значения МПК 512 мкг/мл и выше. Проверка Мирамистина® в отношении самой быстро растущей культуры Malassezia furfur N 607 показала, что наличие в среде даже 6000 мкг/мл препарата не могло полностью подавить рост микроорганизмов. Однако, число ми кроколоний в агаре в опытном варианте по сравнению с конт ролем без Мирамистина® было значительно ниже. Ранее нами показано, что необычная по сравнению с прочими дрожжами устойчивость дрожжей Malassezia к экстремальным осмотическим условиям (насыщенный раствор NaCl) обусловлена наличием у них внешней липидной оболочки [Гейдебрехт О. В. с со авт., 2003], которой лишены другие дрожжи. Есть основание полагать, что резистентность к поверхностноактивному Мирамистину® также связана с липидным слоем, покрывающим клетки Malassezia. Концентрация Мирамистина® в коммерческих препаратах составляет, как правило, 0,01% (100 мкг/мл). Таким образом, вероятнее всего, использование Мирамистина® для уст ранения дрожжей родов Candida, Rhodotorula, Cryptococcus и Trichosporon не должно сопровождаться элиминацией Malassezia, например, с поверхности кожи. Это очень важно, поскольку дрожжи рода Malassezia являются представителями нормальной микрофлоры кожи человека.

Пределы МПК ряда препаратов - азолов (орунгал, дифлю кан, низорал, клотримазол), а также нитрофунгина, леворина, пимафуцина, нитроксолина, экзодерила (тербинафина), исследованные у вышеуказанных культур, обсуждались нами ранее [Арзуманян В. Г., 2002]. Укажем здесь лишь очевидные разли чия по сравнению с Мирамистином®. При всей резистентности к Мирамистину®, дрожжи рода Malassezia очень чувствительны к антимикотикам азольной группы: величины МПК азолов для Malassezia ниже 2 мкг/мл, в то время как именно к азолам из ученные штаммы базидиомицетов - Cryptococcus, Rhodotorula и Trichosporon - в упомянутом диапазоне концентраций нечувствительны.

Поскольку для нелипофильных дрожжей была использована жидкая среда, оказалось возможным провести сравнительную оценку фунгицидного эффекта различных препаратов по отношению к изучаемым штаммам. По истечении 10 суток из ячеек, соответствующих МПК, делали высевы на плотную среду для проверки жизнеспособности. Результат выражали как процент культур данного рода, оказавшихся нежизнеспособными. В отношении всех четырех родов нелипофильных дрожжей наиболее выраженным фунгицидным эффектом обладал Мирамистин® - 57% убитых культур Candida spp. и 100% культур базидиомицетов. Среди прочих препаратов в порядке убывания фунгицидной активности можно перечислить пимафуцин, леворин, 5НОК и нитрофунгин. Азолы не являлись фунгицидами не только в отношении базидиомицетов (0% убитых культур), но и большинства штаммов Candida spp.(0-14 %).

Таким образом, Мирамистин® является эффективным фунгицидным препаратом, более активным в отношении нелипофильных оппортунистических дрожжевых грибов, нежели липофильных симбионтов человека Malassezia spp. МПК мирамистина для нелипофильных дрожжей (16-128 мкг/мл) сравнима с концентрациями препарата, используемыми в клинике (100-400 мкг/мл).