Кинетика роста условно-патогенных микроорганизмов

Мирамистин. Сборник трудов / Под ред. Ю. С. Кривошеина. - М., Медицинское информационное агентство, 2004. - с.6265.

БИТКОВА Е. Е., СКАЛА Л. З., МИХАЙЛОВА Н. Н., ХВАТОВ В. Б., КИРИЧЕНКО И. М.
НИИ СП им. Н.В.Склифосовского, 15 ГКБ, НИИВС им. И.И.Мечникова (Москва)

ИЗУЧЕНИЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ МИРАМИСТИНА® НА КИНЕТИКУ РОСТА УСЛОВНОПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ В ЖИДКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ

В решении проблемы профилактики и лечения гнойносептических осложнений, вызываемых условнопатогенными микроорганизмами, большое значение имеет обнаружение и идентификация возбудителя, а также определение степени его чувствительности к антимикробным средствам. Определение их минимальной ингибирующей концентрации (МИК) в отношении конкретных возбудителей, выделенных от пациентов, позволяет проводить адекватную антибактериальную терапию, минимизировать возможные побочные эффекты, уменьшить материальные затраты. В клинической практике широко используется отечественный, утвержденный Фармакопейным Государственным комитетом Минздрава РФ 16.07.1999 г (регистрационное удостоверение № 001926/012002) препарат Мирамистин® - антисептик широкого спектра действия из класса поверхностноактивных веществ, обладающий выраженным антимикробным действием в отношении грамположительных и грамотрицательных, аэробных и анаэробных, спорообразующих и аспорогенных бактерий [Разработка и внедрение в практику новых лекарственных форм отечественного антисептика Мирамистина®». Сателлитный симпозиум 1й международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств»: Тезисы докладов. - М., 2001, 87 с.].

Влияние Мирамистина® на кинетику роста условнопатогенных бактерий изучали с помощью микробиологического анализатора, включающего планшетный фотометр «BIOSCREEN/iEMSreader MF» (фирма «LabMethod», Финляндия), компьютер, принтер, программу «BACT». Прибор имеет встроенные термостат, встряхиватель, 8 светофильтров с длинами волн 340, 405, 414, 450, 492, 540, 620, 690 нм. Приращение оптической плотности в ячейке с инокулированной жидкой питательной средой свидетельствует о размножении в ней микроорганизмов. Высокий уровень корреляции оптической плотности с количеством микробных тел позволяет следить за кинетикой размножения микроорганизмов, получать и оценивать так называемые кривые роста бактерий [Скала Л.З., Си доренко С.В., НехорошеваА. Г., Резван С. П., Карп В. П. Практические аспекты современной клинической микробиологии. - М.,: ТОО «ЛАБИНФОРМ», 1997. - 184 с.].

В качестве объекта исследования использованы штаммы наиболее часто встречающихся условнопатогенных микроорганизмов, возбудителей гнойновоспалительных заболеваний: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris. В лунки стандартного 96лу ночного планшета вносили по 150 мкл инокулированной жидкой питательной среды, содержащей 10⁴-10⁶ КОЕ вышеуказанных бактерий, и добавляли 50 мкл водного раствора Мирамистина® в конечной концентрации от 0,75 до 50 мкг/мл в культуральной среде. В контрольные лунки вносили по 150 мкл инокулированного бульона и 50 мкл интактного бульона. После проведения 18 часовых кинетических измерений роста бактерий в присутствии Мирамистина® рассчитывали процент подавления роста микроорганизмов Мирамистином® по сравнению с ростом бактерий в контрольных лунках. Программное обеспечение данных исследований позволяло с точностью до 5 мин определять время вступления микроорганизмов в стадию экспоненциального роста (лаг период). Для исследуемых микроорганизмов данный параметр зависел от исходной концентрации микроорганизмов и составлял при 10⁶ КОЕ/мл 100-200 мин, при 10⁵ КОЕ/мл - 150-250 мин, а при 10⁴ КОЕ/мл - 200-400 мин.

Установлено, что чувствительность стафилококков к  Мирамистину® существенно выше, чем синегнойной палочки и протеев (см. табл.). Мирамистин®в концентрации 5 мкг/ мл и выше обладал 100%-ной бактерицидной активностью в отношении S. aureus, тогда как для полного подавления роста P. aeruginosa и

P. vulgaris необходима концентрация 12,5-25,0 мкг/ мл. E. coli и K. pneumoniae по чувствительности к Мирамистину® занимают промежуточное положение между указанными бактериями. МИК Мирамистина® в отношении данных бактерий соответствует 7-12 мкг/ мл. Выявлена способность Мирамистина® задерживать вступление микроорганизмов в стадию экспоненциального роста, что обозначено как бактериостатический эффект. Для оценки (в %) величины бактериостатического эффекта (БСЭ) предложена формула: БСЭ = (t0 : tk1) х k, где t0 - длительность фазы отсутствия роста в исследуемом образце (лагпериод в мин), tk - длительность фазы отсутствия роста в контрольном образце (лагпериод, в мин), k- коэффициент пересчета (в %), определяемый отношением максимального периода исследования - 1080 мин (18 час) к продолжительности отсутствия регистрации роста бактерий в чистой культуре. Мирамистин® в концентрациях выше 6 мкг/мл обладает бактериостатическим эффектом в отношении всех исследуемых штаммов.

Таблица Антимикробная активность Мирамистина® в отношении условно патогенных микроорганизмов

Примечание: * представлены результаты 10 серий экспериментов при исходной концентрации 10⁶ КОЕ/мл, средние арифметические ошибки (± т) не превышают 7% от средних арифметических величин (М).